Hématologie
Hématologie :
II.Examens : Pour chaque
examen, les tubes sont numérotés et enregistrés.
Les tubes
contiennent un volume d’anticoagulant. Un anticoagulant est une substance chimique ayant la
propriété d'inhiber la coagulabilité naturelle du sang. Le sang ainsi traité ne coagulera pas ou alors
moins vite, mais gardera la même viscosité. L'usage principal de l'anticoagulant est à visée
médicale.
L’anticoagulant utilisé est l’
EDTA (Ethylene diamine Tetra-acetic Acid),
c’est un chélateur du calcium c'est-à-dire qu’ il capte les
ions Ca2+ qui sont un facteur important de la coagulation.
II.1.Formule Numération Sanguine
(FNS) :
Conditions de prélèvement :
ü Prélèvement de sang veineux (en général au pli du
coude). Le tube de sang contient un anticoagulant l’ EDTA.
ü Il n'est pas nécessaire d'être à jeun. Il n'y a pas de
précaution particulière à observer.
II.1.1.Intérêt du dosage :
La numération sanguine consiste à
compter (grâce à des automates le plus souvent) les différents éléments
cellulaires du sang à savoir : globules blancs (ou leucocytes), globules rouges
(ou hématies) et plaquettes sanguines.
Des paramètres liés à ces éléments sont également mesurés pour
certains (taux d'hémoglobine, volume globulaire moyen = VGM) ou calculés
(hématocrite, teneur corpusculaire moyenne en hémoglobine = TCMH, concentration
corpusculaire moyenne en hémoglobine = CCMH). D'autres indices tels que :Indice
de distribution des globules rouges ou des plaquettes).
Cet examen est essentiel pour apprécier un dysfonctionnement de la
moëlle osseuse ou des perturbations dites "périphériques" (anémies,
augmentation des globules blancs en réponse à une attaque de l'organisme,
problème de coagulation et consommation des plaquettes…).
II.1.2.Mode opératoire :
Prélèvement
de sang veineux (en général au pli du coude). Le tube de sang contient un
anticoagulant.
Bien mélanger le tube.
Mettre le tube sous une seringue de
l’appareil qui va aspirer un volume de 20µl de sang total.
L’automate est appelé Le coulter,
ce dernier contient à l’intérieur deux seringues, l’une pour les globules
blancs et l’autre pour les globules rouges.
Les globules rouges subissent une
lyse par le premier réactif ensuite, elles sont libérées, leur DO est lues par
le spectrophotomètre.
Le deuxième réactif est un isoton,
il sert à nettoyer l’appareil après chaque passage d’échantillon.
L’appareil affiche ensuite les
résultats qui seront imprimées.
II.1.3.Valeurs normales :
3 à 10 ans
|
Femme
|
Homme
|
|
| Hématies(million/mm3) |
3.5-5.0 |
4.0-5.3 |
4.2-5.7 |
| Hémoglobine(g/100ml) |
12.0-14.5 |
12.5-15.5 |
14.0-17.0 |
| Hématocrite (%) |
36-45 |
37-46 |
40.52 |
| VGM (µ3) |
74-91 |
80-95 |
80-95 |
| TCMH (pg) |
24-30 |
28-32 |
28.32 |
| CCMH (%) |
28-33 |
30-35 |
30-35 |
| Leucocytes (/mm3*1000) |
4500-1300 |
4000-10000 |
4000-1000 |
| Plaquettes (/mm3*1000) |
150-400 |
150-400 |
150-400 |
II.1.4.Variations pathologiques :
- Anémies
Diminution du taux d'hémoglobine, accompagné d'une diminution du nombre des globules rouges. Les paramètres calculés (hématocrite, VGM, TCMH, CCMH) permettent de préciser le mécanisme en cause. - Anémie
d'origine centrale (moëlle osseuse)
Insuffisance médullaire, cancer, leucémie, dysérythropoïèse - Anémie
d'origine périphérique
Hémolyse, hémorragie, carence en fer, anémie inflammatoire, saturnisme, hémodilution - Polyglobulies
Augmentation du nombre de globules rouges :
Maladie de Vaquez
Polyglobulie réactionnelle, hypoxémique ou tumorale. - Hypoleucocytoses (diminution
du nombre de globules blancs)
Certaines infections virales ou parasitaires, insuffisance médullaire, certaines anémies, troubles de répartition, origine toxique ou médicamenteuse, certains cancers et leucémies - Hyperleucocytoses (augmentation
du nombre de globules blancs)
Infections bactériennes, syndromes inflammatoires, certaines parasitoses, nécroses tissulaires, cancers, syndromes myéloprolifératifs, certaines leucémies, réactions allergiques médicamenteuses - Thrombopénie (diminution
du nombre des plaquettes)
Destruction des plaquettes (polytransfusés), hémodilution, atteinte virale, trouble immunitaire (maladie auto-immune, réaction allergique), coagulation intra-vasculaire, chirurgie avec circulation extra-corporelle, purpura, syndrome hémolytique et urémique de l'enfant, aplasie médullaire, hémopathie maligne, maladie constitutionnelle héréditaire (anomalie de May-Hegglin) - Thrombocytose (augmentation
du nombre des plaquettes)
Splénectomie
Maladies infectieuses
Maladies inflammatoires
Maladie de Hodgkin
Réticulosarcomes
Interventions chirurgicales
Stress, brûlures graves
Cirrhose, pancréatite, atrophie splénique
Syndrome myéloprolifératif
Thrombocytémie essentielle
II.2.Vitesse de sédimentation (VS) :
II.2.1.Principe :
La vitesse de sédimentation est le
temps nécessaire aux éléments cellulaires sanguins (globules blancs, globules
rouges et plaquettes) pour sédimenter c'est-à-dire tomber librement au bas
d'une colonne de sang incapable de coaguler (grâce à l'anticoagulant utilisé
pour le prélèvement). Elle est exprimée en hauteur de cellules sédimentées
mesurée au bout d'1 heure et de 2 heures. La méthode de référence est la
méthode de Westergren. La vitesse de sédimentation est un élément d'orientation
diagnostique, non spécifique mais simple à réaliser.
II.2.2.Mode opératoire :
Prélèvement
de sang veineux (en général au pli du coude). Le tube de sang contient un
anticoagulant.
Le prélèvement est effectué de
préférence le matin à jeùn. A l’aide d’une poire, le sang est aspiré dans un
tube de Westergren, jusqu’à la graduation 0.
Le tube est ensuite fixé au support bien verticalement. La
base du support doit être horizontale et disposée dans un lieu à l’abri de la
chaleur. Pendant le temps de
sédimentation, il est important d’éviter les chocs et les vibrations
(centrifugeuses de paillasses…).
Après une heure, noter en mm, la hauteur du plasma surnagent à partir de
la graduation 0, après une autre heure, noter aussi en mm, la hauteur du
surnagent à partir de la valeur précédente.
II.2.3.Valeurs normales :
ü
Chez l’homme : 1 à 10mm
ü
Chez la femme : 3 à 14mm
II.2.4.Variations pathologiques :
Ø
Augmentation :
Age
Grossesse
Infections
bactériennes, certaines parasitoses
Inflammation : rhumatisme articulaire aigu, polyarthrite rhumatoïde Péricardites,
endocardites, artérites, thromboses vasculaires
Lupus, sclérodermie, polymyosites
Maladie de Kahler, maladie de Waldenström, maladie de Hodgkin
Polyglobulies
Fortes hyperleucocytoses (leucémies aiguës)
Certaines anémies hémolytiques et hémoglobinopathies
Cirrhoses et affections hépatiques Coagulation
intra-vasculaire disséminée
Maladie de Crohn, entéropathies Certains
cancers
Obésité et hypercholestérolémie
Ø Médicaments pouvant interférer dans le dosage :
Diminution avec
anti-inflammatoires
Augmentation avec
oestrogènes
II.3.Taux de réticulocytes :
II.3.1.Intérêt du dosage :
Les réticulocytes sont les
précurseurs des globules rouges. Leur présence dans le sang périphérique en
quantité augmentée indique une production augmentée de globules rouges dans la
moëlle osseuse, pour combler un déficit lié à une anémie. On parlera alors
d'anémie régénérative ; dans le cas contraire, on parle d'anémie arégénérative.
Le taux de réticulocytes sanguin est donc un élément important pour appréhender
le mécanisme en cause d'une anémie.
Réticulocytes > 120 000 mm3
==> anémie régénérative
Réticulocytes > 120 000 mm3
==> anémie arégénérative
Lorsque Hb < 12 , le taux de
réticulocytes sera calculé.
II.3.2.Mode opératoire :
Prélèvement de sang veineux (en général au pli du coude). Le tube de sang
contient un anticoagulant.
Il n'est pas nécessaire d'être à jeun. Il n'y a pas de précaution
particulière à observer.
Agiter le tube de sang total. Prélever à l’aide d’une pipette réglable,
100µl de colorant bleu de crésyl et déposer dans un tube sec, ajouter 100µl de
sang total. Bien mélanger à l’aide la pipette et laisser au bain-marie à 37°C
durant 20 minutes.
v Si le taux d’hémoglobines est entre 12 et 10 (10 volume
de sang à prélever est d’un volume c'est-à-dire 100µl .
v Si le taux d’hémoglobines < 10 ==> volume de sang à prélever est
entre 1 volume et demi et 2 volumes c'est-à-dire entre 150 µl et 200 µl.
Après 20 minutes, prélever une goutte et l’étaler sur une lame propre.
Laisser sécher. Déposer une goutte d’huile d’immersion et observer au
microscope au grossissement (*100).
Les hématies apparaissent en bleu (elles sont vides à l’intérieur) et les
réticulocytes apparaissent en bleu-violet ( elles ont des filaments ou des
granules à l’intérieur).
Compter un (1) champ d’hématies et neuf (9) champs de réticulocytes.
|
R : réticulocytes ;
H : hématies .
II.3.3.Valeurs normales :
Taux de réticulocytes : 25000 -
75000 / mm3 soit 0.5 % à 2 % .
II.3.4.Variations pathologiques :
ü Diminution :
Erythroblastopénie, aplasie médullaire
Anémie inflammatoire, anémie par carence en fer, anémie par carence en folates et vitamine B12, anémie réfractaire et syndromes myélodysplasiques, certains myélomes et leucémies
Erythroblastopénie, aplasie médullaire
Anémie inflammatoire, anémie par carence en fer, anémie par carence en folates et vitamine B12, anémie réfractaire et syndromes myélodysplasiques, certains myélomes et leucémies
ü Augmentation :
(réticulocytes > 120000 :mm3 anémies régénératives)
Anémie hémolytique
Anémie post-hémorragique
Sortie d'aplasie médullaire
(réticulocytes > 120000 :mm3 anémies régénératives)
Anémie hémolytique
Anémie post-hémorragique
Sortie d'aplasie médullaire
II.4.Hématocrite ( HTE) :
II.4.1.Intéret :
L’hématocrite désigne la
proportion de globules rouges contenus dans le sang par rapport au volume total du sang
II.4.2.Mode opératoire :
Nettoyer le bout du doigt avec de l’alcool, piquer le patient à
l’aide d’une aiguille. Avec un coton sec enlever l’excès de sang, aspirer le
sang à l’aide d’un tube capillaire hépariné et fixer avec de la patte à modeler
le bout du tube. Mettre le tube dans une centrifugeuse de façon à ce que le
bout boucher par la patte à modeler soit vers l’extérieur. La centrifugeuse est
réglée à 130*100 rpm durant 2 minutes.
Après 2 minutes, obtention d’un culot et du plasma. Le taux d’hématocrite
est le volume qu’occupe le culot par rapport au plasma.
Glisser le tube sur une règle graduée en mm et lire le taux
d’hématocrite.
|
II.4.3.Valeurs normales :
Enfants : 36 à 45 %
Adultes :
ü
Hommes : 40 à 50 %
ü
Femmes : 37 à 47 %
II.4.4.Variations pathologiques :
On
mesure le taux d'hématocrite pour avoir une idée de la santé du patient :
Ø Augmentation :
- un taux élevé d’hématocrite peut signifier une production excessive de cellules sanguines suite à la prise de produits dopants,
ou des conséquences de maladies spécifiques. Mais cela peut également signifier
une déshydratation, caractérisée par une perte d'eau du plasma sanguin.
Ø Diminution :
- à l'inverse, un taux d’hématocrite faible peut être un signe d’anémie (manque de fer) ou d’hémorragie.
II.5.Frottis
sanguin :
II.5.1.Principe :
Un frottis sanguin est du sang étalé sur une lame de microscope, dans le but d'observer ses cellules et aussi les dénombrer. Le
frottis doit subir une coloration pour révéler certaines cellules qui sans cela
seraient transparentes, donc non visibles. Il permet également de repérer un
éventuel parasite par exemple.
II.5.2.Mode opératoire :
Prélèvement
de sang veineux (en général au pli du coude). Le tube de sang contient un
anticoagulant.
Bien mélanger le tube
contenant le sang total et un anticoagulant, prélever à l’aide d’une pipette
une goutte de sang et la déposer sur une lame propre.
§ Marquer la lame de verre
§ Déposer une petite goutte de sang à 1
cm du bord de la lame, à l'aide d'un tube capillaire
§ Placer le bord de l'étaleur en
contact avec la lame, puis entrer en contact avec la goutte de sang (incliner
l'étaleur à 45°)
§ Laisser le sang s'étaler le long de
l'arête de l'étaleur
§ Pousser l'étaleur rapidement,
régulièrement, et sans trop appuyer, tout en gardant la même inclinaison
§ Soulever progressivement l'étaleur,
en fin d'étalement. Le frottis doit s'arrêter à environ 1 ou 2 cm de l'autre
extrémité de la lame.
§ Sécher immédiatement le frottis, par
agitation à l'air.
II.6.Coloration au May-Grunwald Giemsa (MGG) :
II.6.1.Principe :
La coloration de May-Grünwald Giemsa est une méthode de coloration
utilisée en hématologie pour différencier les cellules du sang lors des préparations
cellulaires (cytologie)
II.6.2.Mode opératoire :
Après avoir préparé le frottis sanguin, les lames sont déposées
dans un appareil de marque (HEMA-TEK, SLIDE STAINER), celui –ci va procéder à la coloration.
Il repose sur l'action complémentaire de deux colorants
neutres et sur l'affinité des éléments cellulaires pour les colorants acides ou basiques. Ces deux colorants
sont :
§ Le May-Grünwald, neutre, contenant un colorant acide, l'éosine, et un colorant
basique, le bleu de méthylène (sous
forme d'éosinate de bleu de méthylène).
§ Le Giemsa,
neutre, contenant lui aussi de l'éosine, et un colorant
basique, l'azur
de méthylène (sous forme
d'éosinate d'azur de méthylène)
Ces deux colorants sont
solubilisés dans l'alcool méthylique et sont de ce fait inactifs : c'est le
contact de l'eau qui leur donne un pouvoir colorant. Les sels se dissocient
alors en colorant acide (l'éosine) et basique (azur et bleu de méthylène).
§ Les éléments cellulaires acides, seront colorés
sélectivement par les colorants basiques. Ces éléments sont qualifiés de basophiles (ADN, cytoplasme des lymphocytes)
§ Les éléments cellulaires basiques, seront colorés
sélectivement par les colorants acides. Ces éléments sont qualifiés d'acidophiles ou d'éosinophiles (cytoplasme des hématies)
§ Les éléments neutrophiles sont colorés à la fois par les
colorants acides et basiques.
§ Le rinçage : L'eau utilisée pour activer les
colorants et rincer les lames doit être le plus proche possible de la
neutralité (pH compris entre 6.8 et 7.4) pour
ne pas accentuer les colorations (un pH basique accentue le bleu de méthylène
aux dépens de l'éosine, et inversement)
§ Après toutes ces étapes, l’appareil fait sortir
les lames.
§ Laisser sécher à l’air libre.
§ Déposer une goutte d’huile d’immersion et observer
au microscope à l’objectif *100 afin de dénombrer les différentes cellules.
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